DNA 甲基化是通过在胞嘧啶环的5-碳上共价添加一个甲基基团来发生的,结果产生5-甲基胞嘧啶。这些甲基基团伸入 DNA 的主槽中,抑制转录。在人类 DNA 中,5-甲基胞嘧啶约占基因组 DNA 的1.5%,主要位于 CpG 位点。在0.3到2 kb的 DNA 片段上,有 CpG 位点的簇,被称为 CpG 岛,通常位于基因的启动子区域或其附近,即转录开始的地方。在基因组 DNA 的大部分区域,大多数 CpG 位点都高度甲基化。然而,生殖系组织中的 CpG 岛和正常体细胞的启动子保持未甲基化状态,允许基因表达发生。当基因启动子区域的 CpG 岛被甲基化时,基因的表达被抑制。这种抑制可能是通过直接抑制特定转录因子的结合,以及间接通过招募甲基-CpG 结合蛋白及其相关的抑制性染色质重塑活性来实现的。除了对基因转录的影响外,DNA 甲基化还涉及基因组印记,这指的是基因的亲本起源特异性表达,以及染色质域的形成。
DNA 甲基化在正常和病变细胞中通过几个不同的层面进行控制。甲基基团的添加是由一类酶,即 DNA 甲基转移酶(DNMTs)来执行的。基因启动子附近的染色质结构也会影响 DNA 甲基化和转录活性。三种 DNMTs(DNMT1、DNMT3A 和 DNMT3B)是建立和维持 DNA 甲基化模式所必需的。另外两种酶(DNMT2 和 DNMT3L)可能也有更专门化但相关的功能。DNMT1 似乎负责维持已建立的 DNA 甲基化模式,而 DNMT3A 和 DNMT3B 似乎介导新的或去新 DNA 甲基化模式的建立。DNMT3L 被认为是一种催化非活性的 DNA 甲基转移酶调节因子,对 DNMT3A 和 DNMT3B 的功能至关重要。像癌细胞这样的病变细胞可能有所不同,DNMT1 单独不负责维持异常基因的高甲基化,DNMT1 和 DNMT3B 可能在这一功能上是协同作用的。局部染色质结构也有助于控制 DNA 甲基化。
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图1。DNA甲基转移酶和S-腺苷甲硫氨酸介导的胞嘧啶甲基化
DNA 甲基化的重要性通过越来越多的人类疾病得到强调,这些疾病发生在 DNA 甲基化信息未能正确建立和/或维持时。与 DNMTs 表达或活性增加相关的异常 DNA 甲基化已在许多不同疾病中被发现,特别是在癌症中。DNMTs 的抑制可能导致去甲基化和沉默基因的表达。目前正在开发 DNMT 抑制剂作为潜在的抗癌剂。传统的 DNMT 活性/抑制测定方法耗时、劳动密集、通量低和/或产生放射性。原始的 EpiQuik™ DNMT 活性/抑制测定试剂盒通过引入一种简单的 ELISA 类似的 96 孔板格式的方法解决了这个问题。
艾美捷DNMT Activity试剂盒(P-3009)是对其前身试剂盒的进一步改进,通过增强样本信号和显著最小化背景信号,此外,其灵敏度是前身试剂盒的五倍。
1、比色法检测,步骤简单易行,方便快速。整个程序可在3小时45分钟内完成。
2、安全创新的比色法检测,无需放射性、提取和色谱。
3、超灵敏的检测限可低至 0.5 g 的核提取物或 0.5 ng 的纯化酶,比前身试剂盒好五倍。
4、优化的抗体和增强剂溶液允许对 5-甲基胞嘧啶(5-mC)具有高度特异性,不与未甲基化的胞嘧啶发生交叉反应。
5、96 条孔微孔板格式,适用于低通量或高通量分析。
DNMT Activity试剂盒检测原理:
EpiQuik™ DNMT 活性/抑制测定超试剂盒(比色法)包含了测量 DNMT 活性或抑制所需的所有试剂。在这种测定中,一个通用的 DNMT 底物被稳定地包被在微孔板孔中。DNMT 酶从 AdoMet 转移一个甲基基团到胞嘧啶上,使 DNA 底物发生甲基化,并且甲基化的 DNA 可以被抗 5-甲基胞嘧啶抗体识别。然后,通过在微孔板分光光度计上读取 450 纳米波长下的吸光度,以类似于 ELISA 的反应测量甲基化 DNA 的比例或数量,这与酶活性成正比。测量到的光密度强度与 DNMT 酶的活性成正比。
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