5-羟甲基胞嘧啶（5-hmC）作为第六个具有转录调控功能的DNA碱基，在人类和小鼠大脑以及胚胎干细胞中含量丰富。在哺乳动物中，它可以通过5-mC的氧化产生，这是一种由5-mC羟化酶的十一位易位（TET）家族介导的反应。5-hmC已被证明是组织特异性的，从培养细胞系中检测不到的水平到人脑组织中的0.6%，在某些其他物种中可能高达总DNA的8%。5-hmC作为表型和基因表达中重要的表观遗传修饰的生物学意义最近得到了认可。例如，在几乎所有的癌症中，5-hmC含量的总体下降（DNA低甲基化）都已被证明是癌症的分子标志物和治疗靶点。
MethylFlash™Global DNA羟甲基化（5-hmC）ELISA简易试剂盒（比色法）是一套完整的优化缓冲液和试剂，通过以简化的“一步”ELISA格式特异性测量5-羟甲基胞嘧啶（5-hmC）的水平，比色法定量全球DNA羟甲基化状态。作为Epigentek流行的全球DNA甲基化技术的第四代技术，它通过提高速度、简单性、灵敏度和可重复性，进一步改进了前代MethylFlash试剂盒。
5-hmC DNA ELISA试剂盒还专门针对与 MethylFlash 全球 DNA 甲基化（5-mC）ELISA 简易试剂盒（比色法）配对使用进行了优化，可以同时定量检测甲基化 DNA 和羟甲基化 DNA。
艾美捷5-hmC DNA ELISA试剂盒（P-1032）具有以下优点和特性：
快速 - 简化步骤，整个程序仅需2小时*
稳健 - 改进的试剂盒组成允许测定具有更大的“信号窗口”，并减少重复间的变异
方便 - 固有的低背景噪音，从而消除了 DNA 变性和板封阻步骤的需求
敏感 - 检测限可以低至输入 DNA 中的 0.01% 羟甲基化 DNA
特异 - 对 5-hmC 高特异性，对样本 DNA 指示浓度范围内的未甲基化胞嘧啶或甲基化胞嘧啶无交叉反应
通用 - 阳性和阴性对照，并允许检测任何物种的 DNA 羟甲基化，无论是单链还是双链输入 DNA
准确 - 优化的阳性对照可以按百分比比例分馏，使测定更加准确并与 HPLC-MS 分析高度可比
灵活 - 条形孔微孔板格式使测定可用于手动或高通量分析
基于单一样本测定的重复测定
5-hmC DNA ELISA试剂盒的原理与操作流程：
这个试剂盒包含了量化全局 DNA 羟甲基化所需的所有试剂。在这个测定中，DNA 被绑定到经过特殊处理以具有高 DNA 亲和性的条形孔中。DNA 的羟甲基化部分使用基于 5-hmC 单克隆抗体的检测复合物以一步法检测，然后通过在微孔板分光光度计中读取吸光度来进行比色定量。羟甲基化 DNA 的百分比与所测量的 OD 强度成正比。
起始材料：
输入的 DNA 应该是相对纯净的，260/280 比值大于 1.6，并且可以用水或 TE 缓冲液稀释。每个反应的 DNA 量可以从 20 ng 到 200 ng。然而，我们推荐使用 100 ng 的 DNA，这是获得z佳结果的优化输入量。
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