骆驼外周血单核细胞(PBMC)分离试剂盒是一种即用型试剂盒,含有无菌稀释缓冲液、密度培养基和密度垫,用于从包括骆驼、羊驼在内的各种骆驼家族成员的全血中分离PBMC细胞。

 

利用细胞密度的差异将粒细胞和红细胞从外周血中分离出来血液单核细胞(PBMCs)。分离外周血单个核细胞常见的技术是混合血液使用一种能够聚集红细胞的化合物,从而提高其沉降速率。这个SepOBuffer™中的活性成分是泛影酸钠和具有渗透压的多糖290+15 mOsm/L,密度1.077+0.001 g/ml。SepOBuffer™中的多糖可增强离心过程中红细胞聚集增加红细胞沉降。PBMCs较低密度保留在血浆SepOBuffer™界面中,可以从当红细胞沉淀时,试管。全血中的PBMCs可以可靠、快速地使用SepOBuffer™以纯形式分离。

 

艾美捷FabGennix-PBMC分离试剂盒|骆驼科(FGI-PBMC1930)组成:

PBMC SepOBufferTM  150 mL

PBMC Dilution Buffer   250 mL

RBC Lysis Buffer   50 mL

PBMC separation tubes with medium grit frit   10 tubes

 

协议:

1. 高密度淋巴细胞分离液,SepOBuffer™(货号 # FGI-1930)在使用前必须达到室温。

2. 将SepOBuffer™加入到含有熔合介质磨砂滤网的无菌试管中(目录号 # FGI-1933-01)。
推荐体积和管道尺寸:

3. 全血达到室温后,用PBMC稀释液(货号 # FGI-1931)进行稀释。

4. 将稀释后的血液分层放入含有SepOBuffer™的试管中。注意不要将稀释后的血液与SepOBuffer™混合。

5. 在不使用刹车的外挂式桶装转子离心机中,以850x G的速度离心20分钟,温度设定为250C。如果血液存放超过两小时,则将离心时间增加到30分钟。

6. 丢弃上层血浆层,并收集位于血浆-SepOBuffer™界面含有PBMCs的薄层。

7. PBMCs在外挂式桶装转子离心机中以1500RPM的速度在4oC下离心10分钟形成细胞沉淀。

8. 将细胞沉淀通过在PBMC稀释液(货号 # FGI-1931)中重新悬浮来洗涤,并在4oC下以1500 RPM的速度在外挂式桶装转子离心机中离心10分钟。

9. 丢弃上清液,PBMCs部分中的红细胞污染通常在1-5%之间,这可以通过使用裂解缓冲液(货号 # FGI-1932)来消除,如下所述。

10. 细胞沉淀在5ml的裂解缓冲液(FGI-1932)中重新悬浮,并在室温下孵育5分钟。孵育后,用4oC的PBMC稀释液补充试管至顶部,并在4oC下以1500 RPM的速度在外挂式桶装转子离心机中离心10分钟。

12. 丢弃上清液,并保留富含PBMCs的细胞沉淀。

13. 细胞沉淀在PBMC稀释液中重新悬浮,分装到冷冻管中,并存储在液氮中。

 

本产品仅供研究使用,不适用于人类或临床诊断。

 

艾美捷科技是FabGennix的中国代理商,为科研工作者提供优质的产品与服务。


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