Assay Genie 细胞因子风暴多重面板 9-plex

Assay Genie 细胞因子风暴多重面板 9-plex：

名称： 细胞因子风暴多重组合 9 重

编号： HUAMCOV05

反应： 人

分析物： IL-6、IL-10、IFN-、CCL2/SYCA2/MCP-1、GM-CSF/CSF-2、TNF-、IL-1、IL-2 和 IL-8/CXCL8

样品类型： 细胞培养上清液、血清、血浆、体液和组织/细胞裂解物

检测类型： 多重

检测方法： 流式细胞术

检测时间： 2小时

艾美捷Assay Genie 细胞因子风暴多重面板 9-plex：

缓冲区： 2x NR dAb稀释剂。一个装有 1.5 mL 生物素检测抗体稀释剂的小瓶

冻干标准混合物： 人 COVID-19 多重细胞因子免疫测定。一个含有冻干重组IL-6、IL-10、IFN-、CCL2/SYCA2/MCP-1、GM-CSF/CSF-2、TNF-、IL-1、IL-2和IL-8/CXCL8的小瓶

标准剂量回收率： 70-130%

检测内简历： <10%

检测间简历： <20%

面板中分析物的交叉反应性： 微不足道

样品量： 15 L/测试

Assay Genie 细胞因子风暴多重面板 9-plex协议：

1. 准备滤板模板。标记标准孔、样品孔和空白孔。标准品和样品应一式两份或一式三份运行。如果整个板不使用，请用板密封密封未使用的井。

重要提示：在整个测定过程中将滤板放在滤板盖的顶部，以防止在任何表面上接触板底。

2. 涡旋工作珠悬浮15秒。

3. 向每个孔中加入 45 L 捕获珠工作悬浮液。

注意：保存剩余的捕获珠工作悬浮液，并在2-8C下储存，并有光保护。它可用于在流式细胞仪上设置采集参数。

4. 使用连接到真空源的“流通式”滤板清洗机去除孔中的缓冲液，该真空源已根据滤板清洗机说明进行调整。

5. 使用连接到真空源的“流通式”滤板清洗机去除孔中的缓冲液，该真空源已根据滤板清洗机说明进行调整。

6. 向每个样品孔中加入 30 L CCS、SPB 或 TL 检测缓冲液。

注意：如果预计细胞因子水平非常低（小于20 pg/mL），则可以在不稀释分析缓冲液的情况下运行细胞培养上清液样品。如果是这种情况，请跳过此步骤，在步骤 45 中向每个样品孔中加入 7 L 细胞培养上清液样品。

7. 向每个样品孔中加入 15 L 样品。向每个标准品孔中加入 45 L 标准品。用板密封盖住板。

8. 在室温下在摇床（设置为700rpm）上孵育60分钟。用铝箔包裹滤板避光。

9. 取下板封。使用连接到真空源的过滤板清洗机去除孔中的溶液。

10. 使用连接到真空源的过滤板清洗机去除孔中的溶液。

11. 使用滤板清洗机用100L 1x洗涤缓冲液洗涤孔三次。

12. 在最后一次洗涤后，将板底轻轻敲打在几层纸巾上，以去除板底残留的缓冲液。

13. 向每个孔中加入 25L 生物素化抗体工作溶液。用板密封盖住板。

14. 在室温下在摇床（设置为700rpm）上孵育30分钟。用铝箔包裹滤板避光。

15. 取下板封。使用滤板清洗机去除孔中的溶液。使用滤板清洗器用 100 L 1x 洗涤缓冲液洗涤孔 <> 次。

16. 在最后一次洗涤后，将板底轻轻敲打在几层纸巾上，以去除板底残留的缓冲液。

17. 向每个孔中加入 25L 链霉亲和素-PE 工作溶液。用板密封盖住板。

18. 在室温下在摇床（设置为700rpm）上孵育20分钟。用铝箔包裹滤板避光。

19. 取下板封。使用滤板清洗机去除孔中的溶液。用 100 L 1x 洗涤缓冲液洗涤孔两次。

20. 将板底轻轻敲打在几层纸巾上以去除残留溶液。根据流式细胞仪的样品加载机制，向每个孔中加入 150L 至 300L 1x 读数缓冲液，以重新悬浮磁珠。用板密封盖住板。

21. 将板放在微量滴定振荡器上，以30rpm摇动700秒。

注意：如果流式细胞仪没有 96 孔板加载器，并且需要超过 200 L 的 1x 读数缓冲液来重新悬浮磁珠，请不要摇动板。用P6移液器上下移液8至200次，将磁珠重新悬浮在每个孔中，然后转移到试管中进行采集。取下板封。在流式细胞仪上读取